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金针菇袋式栽培技术:接种

经过灭菌的塑料袋必须冷却至25℃左右时方可接种。一般是塑料袋灭菌后的第二天即可接种,夏天不超过3d,冬天不超过5d接种为好。否则不仅培养基易失水,而且污染率高。接种的关键是严格无菌操作,正确掌握熟练的接种技术,动作力求准确迅速。接种前要先做好两项准备工作:一是选择质量合格的菌种,菌龄以不超过2个月的为宜。若菌种瓶中长有小原基的菌种,只要时间短,原基未发生腐烂或变色的,仍可使用。接种时把原基弃除即可。而已长出子实体且菌盖又开伞的菌种,因已弹射出担孢子,菌种纯度降低不能使用。二是接种前要进行消毒,除去物品表面上的病原菌。常用的消毒剂有下面几种:

(1)甲醛(福尔马林HCHO):无色气体,极易挥发且穿透力极强,有强烈的刺激味,会刺激人的皮肤、黏膜,其40%的水溶液称之为福尔马林。甲醛在冬季常会析出乳白色的聚合物。甲醛易与蛋白质(包括酶)结合而使蛋白质变性,引起菌种和芽孢死亡。甲醛或福尔马林是一种强杀菌剂,常用于接种箱、接种室、培养室、栽培房的熏蒸消毒。挥发甲醛的方法有直接加热法和氧化还原反应法两种。直接加热法是将福尔马林置于容器中,直接在酒精灯上加热蒸发;氧化还原法是甲醛与高锰酸钾反应产生大量热,使甲醛蒸发。

(2)高锰酸钾(KMn04):暗紫色棱状晶体,强氧化剂。溶于水,呈紫红色液体,具有强烈的腐蚀性。高锰酸钾将酶的-SH基氧化为S-S基,使酶失活,导致菌体死亡,是一种高效的消毒剂。0.1%浓度的高锰酸钾水溶液作用10~30min即可杀死微生物的营养体。2%~3%溶液短时间作用可导致菌体和芽孢的死亡。其水溶液暴露在空气中易分解,应随配随用。

(3)漂白粉[主要成分为次氯酸钙Ca(Ocl)2]:白色颗粒粉末,有氯臭,极易潮解,易溶于水、不稳定,遇二氧化碳、光、热分解。本品含氯量为25%,呈碱性。次氯酸钙加水可分解生成次氯酸(HOCl),有较强的杀菌作用。杀菌原因是由于它在分解时释放出氧气和初生氧(O)。O和Cl2的联合作用,侵入细胞与菌体蛋白内使酶发生氧化,促使细胞和病毒死亡。新鲜的有效氯极易挥发失效,需密封,以防潮解。通常使用浓度为2%~5%的水溶液,随配随用,不能久放。直接喷洒地面,用量为20~40g/m2。

(4)酒精(乙醇CH3CH20H):无色透明液体,易挥发,有强烈的酒气味,易燃,沸点为78.5℃,可与水任意混溶。使用乙醇消毒,浓度为70%,作用5min即可杀死细胞营养体,对真菌孢子则需要30~60min。乙醇能使蛋白质脱水变性,干扰微生物新陈代谢,抑制其繁殖。95%乙醇杀菌能力反而减弱,因为它接触菌体后,立即引起菌体表面蛋白质的凝固,形成保护膜,不易渗透入细胞内,故杀菌能力减弱;而70%酒精能渗入菌体细胞,解脱蛋白质表面的水膜,引起新陈代谢障碍,使其失去活性,故有较强的杀菌力。用95%的酒精700ml加水250ml即配成70%的酒精950ml。70%的酒精常用于手的消毒及橡胶手套等制品的消毒。

(5)石炭酸(苯酚C6H50H):低温下的苯酚为无色或白色针状、块状或三菱形晶体,有特殊气味和腐蚀味。在空气中易氧化变红色,熔点为42~43℃。65℃以上能与水任意混合。石炭酸可杀死微生物的营养体,高浓度下可裂解并穿透细胞壁,使菌体蛋白凝聚沉淀;低浓度下可使细胞的主要酶系统失去活性,一般用5%苯酚水溶液作为消毒剂,配制时,先用热水溶化,再加入所需的量。

(6)来苏儿(煤酚皂溶液C6H4OHCH3):黄棕色至红棕色黏稠液体,有酚臭,甲酚含量为48%~52%。来苏儿的杀菌力为石炭酸的4倍,杀菌机理与石炭酸相同。1%~2%来苏儿溶液可用于皮肤浸泡(2min),2%~3%可用于喷洒消毒。常与新洁尔灭、石炭酸等交叉使用于接种箱、无菌室、培养室消毒。

(7)新洁尔灭(十二烷基二甲基苯甲基溴化铵C2lH38NBr):淡黄色胶体状,是阳离子型的表面活化杀菌剂,多作用于菌体的表面,通过阴阳电荷结合,破坏菌体外膜结构,从而改变细胞壁透性,使菌体肿胀死亡。对无芽孢病原菌、霉菌等具有较强的杀菌作用,效果为
石炭酸的几十倍,消毒特点是快速、彻底、高效。新洁尔灭浓度为5%,使用时可稀释20倍,即0.25%浓度,一般用于接种箱、玻璃器皿表面消毒,不适于橡胶手套的消毒,对皮肤及黏膜有轻度刺激,配制后可存放1个月,当溶液呈现显著黄色或产生较多沉淀时,即应废弃。

(8)硫磺:淡黄色结晶或粉末,易燃,发出蓝色光,产生二氧硫(SO2),对杂菌有较强的杀菌能力,若增加空气湿度,二氧化硫和水结合为亚硫酸,能显著增强杀菌效果。常用于熏蒸接种室、培养室。每立方米空间用15g左右为宜。对于周围环境卫生状况较差的培养室或栽培室,使用硫磺熏蒸既经济,效果又好。

来源:中国农业技术网

2011-2-16
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